■ 产品描述： 

小鼠B细胞分选试剂盒是通过阴性分选法从小鼠脾脏、淋巴结或骨髓细胞中分离出B细胞。原理是选用不同的生物素（biotin）标记单克隆抗体对非目的细胞（非B细胞）进行标记，而后通过链霉亲和素（streptavidin）标记的磁珠去除非目标细胞，从而达到小鼠B细胞分选的目的。本试剂盒内抗体组分包含CD11b，无法保留表达CD11b抗体的B细胞，若需要保留该类群细胞（比如需要保留B1谱系的B细胞时），建议使用小鼠Pan B细胞分选试剂盒。分选过程需要用到磁极或者磁力架。

■ 规格和组分： 

■ 储存条件：

2-8°C保存，不可冷冻，有效期见试管标签。

■ 适用范围：

本试剂盒适用于分选小鼠脾脏、淋巴结和骨髓中的B细胞。

■ 设备和试剂要求： 

分选缓冲液：不含钙镁离子的PBS+2 mM EDTA+2% FBS（或0.5%BSA）

无菌红细胞裂解液、计数液 

耗材：70 μm无菌细胞筛网、离心管、无菌流式管

仪器：离心机、磁力架 

■ 样本制备： 

小鼠脾脏：

1. 在70 μm细胞筛网上研磨脾脏，用预冷的PBS冲洗筛网，收集细胞悬液于50 mL离心管中，500 g离心5 min。（骨髓细胞悬液制备后同样使用70 μm细胞筛网过滤，收取至50 mL离心管中。500 g，离心5 min。）

2. 离心结束，弃上清，按照每只小鼠加入5 mL红细胞裂解液（ACK），室温裂解5 min，再加入20 mL PBS终止裂解，500 g离心5 min。

3. 离心结束，弃上清，将脾细胞或骨髓细胞重悬于PBS中，细胞悬液用70 μm细胞筛网过滤后计数。将细胞重悬于分选Buffer中，调整细胞密度为1×10^8 cells/mL。

■ 注意事项：

1.建议选用低吸附移液器吸头和离心管，避免因吸附造成磁珠和抗体的损耗。

2.红细胞裂解可根据所用裂解液不同调整用量及时间，少量红细胞残留不会影响后续分选及细胞纯度。

3.分选样本需为单细胞悬液，若裂红后仍有组织和细胞团块，需要再过一次70 μm细胞筛网后再计数，否则会影响后续细胞分选纯度。

4.如果单次分选少于1×10^7 cells，则将细胞悬液体积补至100 μL，加入2 μL Biotin-Antibody Mix和20 μL Streptavidin-Beads。

5.5 mL流式管分选范围为1×10^7 cells至2×10^8 cells，此范围内分选效果最佳。

6.确保每一步无菌操作，谨防污染。

■ 操作步骤：

■ 分选效果：

从C57BL/6小鼠骨髓细胞和脾脏细胞中分选B细胞，分选前后的细胞用FITC anti-mouse B220抗体（克隆号RA3-6B2）标记后进行流式细胞仪分析，骨髓细胞分选前后的B220+ B细胞纯度分别为27.09%和94.90%，脾细胞分选前后的B220+ B细胞纯度分别为46.41%和98.34%。

从C57BL/6小鼠骨髓细胞和脾脏细胞中分选B细胞，分选前后的细胞用FITC anti-mouse CD3抗体（克隆号145-2C11）和APC anti-mouse CD19抗体（克隆号6D5）标记后进行流式细胞仪分析，骨髓细胞分选前后的B细胞纯度分别为24.6%和95.8%，脾细胞分选前后的B细胞纯度分别为62.9%和97.8%。