■ 产品描述：

人NK细胞分选试剂盒通过免疫磁珠阴选，在短至15分钟内从新鲜或冻存的人外周血单核细胞（PBMCs）或洗涤的白细胞单采术样本中分离出高度纯化的NK细胞。该试剂盒通过靶向细胞表面标志物的抗体去除非NK细胞。非目的细胞用抗体和磁珠标记，并使用磁极进行无柱分选。目的细胞被简单地倾倒入新管中即可。分选后的细胞可立即用于下游应用，如流式细胞术、培养或DNA/RNA提取。

■ 产品信息：

■ 储存条件：

2-8°C保存，不可冷冻，有效期见试管标签。

■ 设备和试剂要求：

 分选缓冲液：PBS，pH 7.2，0.5%BSA（或2%FBS），2 mM EDTA

 计数液 

 耗材：37 μm无菌细胞滤网、离心管、无菌流式管 

 仪器：离心机、磁力架

■ 样本制备：

1.外周血样本

通过使用密度梯度离心液离心，从全血中制备外周血单个核细胞（PBMC）悬液。如果使用冻存的PBMC，在室温（15-25°C）下用终浓度100 μg/mL的DNase I溶液孵育细胞至少15 min，再进行标记和分选。使用37 μm的细胞过滤器过滤细胞悬液去除聚团，以获得最佳结果。制备完成后，将细胞以5×10^7 cells/mL的浓度重悬于缓冲液中。

2.白细胞单采术样本

加入等体积的分选缓冲液，在室温（15-25°C）下以120 ×g离心10 min，清洗外周血白细胞单采样本，重复清洗一遍。如果需要裂解红细胞（RBC），请在第一次清洗步骤前使用裂红液进行裂解。去除上清液，并将细胞以5×10^7 cells/mL的浓度重悬于分选缓冲液中。

■ 注意事项：

1.建议选用低吸附移液器吸头和离心管，避免因吸附造成磁珠和抗体的损耗。

2.5 mL流式管分选范围为1×10^7 cells至2×10^8 cells，此范围内分选效果最佳。

3.确保每一步无菌操作，谨防污染。

4.本产品仅适用于体外细胞培养，不可直接用于临床治疗。

■ 操作流程：

1.取1×10^7细胞加入到5 mL流式管中。

2.加入10 μL Biotin-Antibody Mix，混匀后室温孵育5 min。

3.加入20 μL Streptavidin-Beads，混匀后室温孵育5 min，磁珠使用前应充分混匀。

4.加入2 mL分选缓冲液，使用移液器吹打混匀，置于磁极中，室温静置3 min。

5.拿起磁力架，以一个连续的动作将磁力架和试管倒置，将富集的细胞悬液倒入新试管中。倒出的细胞即为目的细胞。

注：▲以上步骤给出的试剂推荐用量可处理1×10^7个总细胞，若细胞数量少于1×10^7，则按1×10^7个细胞加入试剂；若细胞数量多于1×10^7，应按比例相应增加试剂用量。

▲尽量快速操作，保持细胞冷却，并使用预冷溶液，以减少非特异性细胞标记。

▲磁珠与细胞孵育时需要温和地彻底混匀，以提高分选效率。

■ 分选效果：

使用人NK细胞分选试剂盒从PBMCs中分离NK细胞。用CD56-APC对分离出的细胞进行荧光染色，并通过流式细胞术进行分析，分选前后的NK细胞纯度分别为5.42%和92.8%。